Desenvolvimento e validação de método analítico para determinação do 4-nerolidilcatecol (4-NRC) em solução de proteína plasmática para aplicação em estudos de microdiálise cutânea / Development and validation of analytical method to determine 4-nerolidylcatechol (4-NRC) in plasma protein solution used for cutaneous microdialysis studies

Este artigo aborda a validação de um método analítico para determinação, em amostras de microdiálise, de 4-nerolidilcatecol (4-NRC), uma substância natural extraída da Piper umbellata (Piperaceae) com comprovada atividade antioxidante. O sistema de cromatografia líquida (CLAE-PDA Shimadzu LC 20AT, bomba LC–20AT, injetor com autosampler SIL– 20A) foi acoplado a uma coluna C18 (Phenomenex® Synergi Fusion 4μ RP-80ª, 150 x 4,6 mm). A fase móvel constituiu-se de acetonitrila, metanol e água (54:20:26, v:v:v), sob fluxo de 1,0 mL min-1, com detecção a 280 nm, volume de injeção 30 μL e tempo de corrida 15 minutos. O método foi linear para concentrações de 5,0-200,0 μg mL -1 (r = 0,9996). Os limites de detecção e de quantificação foram, respectivamente, 1,35 e 4,5 μg mL-1. A precisão (DPR <5,0%) e exatidão (99,0 – 112,0%) ficaram dentro dos valores recomendados pela ANVISA. A robustez foi garantida medindo-se a influência da variação do fluxo e da proporção de acetonitrila da fase móvel. As amostras de albumina enriquecidas com 4-NRC e submetidas ao processo de extração apresentaram recuperação de 69 a 95%. O método desenvolvido pode ser aplicado à análise de 4-NRC, com finalidade de estudos de microdiálise cutânea, devido aos adequados parâmetros de validação obtidos.

This paper reports the validation of an analytical method for the determination, in skin microdialysis samples, of 4-nerolidylcatechol (4-NRC), a natural substance extracted from Piper (Pothomorphe) umbellata (Piperaceae) with recognized antioxidant activity. The liquid chromatographic system (HPLC-PDA Shimadzu LC20AT, pump LC-20AT, injector with autosampler SIL-20A) was coupled to a C18 column (Phenomenex® Synergi Fusion 4 μm RP-80 Å, 150 x 4.6 mm), with acetonitrile:methanol:water (54:20:26, v:v:v) as the mobile phase, flowing at 1.0 mL min-1, with detection by absorbance at 280 nm, injection volume 30 μL and running time 15 min. The method was linear for concentrations from 5.0 to 200.0 μg mL-1 (r=0.9996). Detection and quantitation limits were, respectively, 1.35 and 4.5 μg mL-1, precision (RSD < 5.0%) and accuracy (99.0-112.0%) within values recommended by ANVISA. The robustness was tested by measuring the effect of arying the flow-rate and the proportion of acetonitrile in the mobile phase. Microdialysis perfusion solution of albumin (BSA) spiked with 4-NRC and subjected to liquid-liquid extraction showed recovery from 69 to 95%. This method is applicable to the analysis of 4-NRC for the purpose of cutaneous microdialysis studies, in view of the acceptable validation parameters obtained.